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烟草是我国重要的经济作物，近年来由于土地的过度消耗、栽培方式的改变以及农事操作不当，导致土壤养分失衡、土传病害频繁发生，严重影响烟草的产量和品质[1-2]。烟草黑胫病为土传真菌型病害，由于其病原菌在土壤中生活力强，能在土壤中单独存活几个月左右，有的甚至可以在非常恶劣的环境下存活数年，且在土壤中较难清除，而成为对烟草危害较为严重的土传病害之一[3-4]，据报道，烟草黑胫病的发病与土壤理化性质间有一定联系[5]，其中 pH 对黑胫病的发生影响较为显著，当植烟土壤 pH 为酸性时黑胫病发病率较高，而植烟土壤 pH 处于强酸性（pH<4.4）、中性和碱性（pH>6.5）时，对黑胫病的发生具有一定抑制作用[6]；其次，当土壤中硝态氮含量超过一定阈值时，能有效地杀死土传真菌的菌核，对黑胫病起到抑制作用[7]；同时，土壤高含量的不稳定碳组分、低氮、高铵态氮的环境因子条件下也可以有效抑制土传真菌病害的发生[8]。
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土壤理化性质的改变离不开土壤微生物的驱动，土壤微生物作为陆地生态系统的重要组成部分，是物质循环和能量流动的重要媒介，在调节陆地生态系统碳、氮等元素的地球化学循环过程中具有重要意义，有研究发现，土传病害的发生与根际微生物关系密切[9-10]，根际微生物可以通过消耗有机化合物、碳和微量元素，尤其是铁元素等营养元素，或通过产生次级代谢物、溶解酶和效应物，或过度寄生等来抑制病原菌的侵染[11-13]，此外，有益土壤微生物还可以通过引发植物免疫系统来提高植物的性能，对植物病原体甚至草食动物产生抗性[14]，同时，在黑胫病发生中，不同发病程度烟株根际细菌群落组成发生趋向性变化，群落结构发生趋向性改变，土壤微生物多样性降低[15]，而在根际土壤真菌中，发病土壤镰刀菌属（Fusarium）和被孢霉属（Mortierella）显著高于健康土壤[16]。当然，根际环境不但是土传真菌侵染的场所，同时也是微生物与病原菌相互作用的主战场[17]，因此，探究烟草黑胫病的发生与根际环境因子间的关系对其防治至关重要，但目前从黑胫病发病程度出发，探讨土壤微生物间的特异物种与土壤环境因子间的关系研究鲜见报道，基于此，本研究通过对贵州安顺黑胫病发病程度的调查，收集不同发病程度烟株的根际土壤，测定土壤理化性状与酶活性以及细菌、真菌群落结构，旨在探明不同黑胫病发病程度烟株根际土壤理化性状、酶活性与特异物种的相关性，从统计学角度筛选出致病微生物，为黑胫病的生物防治提供理论基础。
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1 材料与方法
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1.1 取样地概况
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取样地块为贵州省安顺市西秀区杨武乡贵大基地，115°2′56″E，37°13′31″N，海拔 1200.2 m，质地为黄壤土，样品采集区域土壤肥力均匀、地块平整。种植品种为云烟 87，土壤基础理化性状为：pH 5.31、有机质（SOM）29.70 g/kg、全氮（TN）1.41 g/kg、碱解氮（AN）147 mg/kg、硝态氮（NO3--N）9.38 mg/kg、铵态氮（NH4 +-N）19.01 mg/kg、全磷（TP）20.43 g/kg、有效磷（AP）28.72 mg/kg、全钾（TK）487.56 g/kg、速效钾（AK）233.08 mg/kg。
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1.2 病害分级方法及土壤样品采集
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按照 GB/T23222—2008 中烟草病虫害分级和调查方法（表1），以株为单位调查烟株发病的等级，病级确定后将烟株连根拔起，去除杂草和沙石，将烟株根围近地表的土壤去掉，然后将烟株根际须根 2 mm 范围内的土壤抖落并收集，待充分混匀后收集装袋，每个病级不少于 3 株烟，土壤样品分为两部分，一部分储存在-80℃用于提取土壤 DNA，另一部分储存在 4℃冰箱用于测定土壤酶活性和土壤养分含量。
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1.3 土壤理化性状及酶活性的测定
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采用电位法测土壤悬浮液中的 pH；用重铬酸钾容量法-稀释热法测定有机质含量；碱解扩散法测碱解氮含量；采用紫外分光光度法测定 NO3--N 含量；采用可见分光光度法测定土壤中的 NH4 +-N 含量；半微量凯氏法测全氮含量；全磷含量的测定方法是氢氧化钠碱熔-钼锑抗比色法；用 0.05~0.025 mol/L（1/2 H2SO4）法测有效磷；全钾含量用火焰分光光度法测定；速效钾采用 NH4OAc 浸提-火焰光度法测定。利用苏州格锐思生物有限公司提供的试剂盒，分别测定土壤脲酶（URE）、蔗糖酶（SUC）、酸性磷酸酶（ACP）和过氧化氢酶（CAT）的活性。
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1.4 土壤微生物的测定
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土壤细菌：采用 Illumina Hiseq 测序方法对土壤微生物群落的丰度和结构进行评价。采用引物 341F 和 806R 对 16S DNA 中 V3～V4 区域进行扩增，检测细菌及真菌的群落结构与多样性。使用 TruSeq®DNA PCR-free Sample Preparation Kit 试剂盒将纯化的 PCR 产物进行文库构建。经过 Qubit 和 Q-PCR 验证文库合格后，使用 NovaSeq6000 对 DNA 文库进行测序。测序数据通过 Qiime V1.9.1 去除平均质量分数低（Q<20）和长度短（<100 bp） 的低质量序列，得到最终的有效数据（Effective Tags）。利用 Uparse 对所有样本的全部 Effective Tags 进行聚类，默认以 97% 的一致性序列聚类成为 OTUs。进一步用 Qiime V1.9.1 中的 blast 方法与 Unit（v7.2）数据库对 OTUs 序列进行物种注释，获得不同分类水平微生物丰度数据。
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土壤真菌：使用 MN NucleoSpin soil Kit（Macherynagel，Dueren，Germany） 从 0.75 g 土壤中提取总 DNA。根据真菌 ITS1 保守区使用引物 ITS1F （5′-CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA-3′）和 ITS2 （5′-GCTGCGTTCTTCATCGATGC-3′）。每 10 μL PCR 混合物中含有 5 μL KOD FX Neo Buffer、0.3 μL 10 μmol/L 引物、2 μL dNTP（每个 2 mmol/L）、0.2 μL KOD FX Neo、50 ng DNA，并加入蒸馏水定容至 10 μL。每个样品进行重复扩增、合并，然后使用 Cycle Pure Kit（Omega，Norcross，GA，USA）进行纯化，形成测序文库，使用 Illumina HiSeq 2500 技术进行测序分析。
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1.5 统计方法
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利用 Excel 2010 和 SPSS 26.0 进行数据处理，用 LSD 法进行显著性检验，显著性为 P<0.05，利用 R 语言进行图形绘制。
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2 结果与分析
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2.1 不同发病程度对土壤理化性质的影响
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不同黑胫病发病程度的土壤理化性质存在显著差异（ 表2），黑胫病发病土壤的 AN、 NO3--N、NH4 +-H、AP 及 AK 含量均显著高于未发病土壤（P<0.05），在发病土壤中，随着发病程度的增加，土壤 SOM、AN、NO3--N 及 AP 含量升高，且处理间差异显著。从相关系数来看，病级与 SOM、TN、NO3--N、NH4 +-N 和 AK 均呈极显著正相关（P<0.01）。
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注：同行数据后不同小写字母表示在 P<0.05 水平上差异显著，r>0 表示正相关，r<0 表示负相关，* 表示土壤指标与发病程度之间显著相关 （P<0.05），** 表示土壤指标与发病程度之间极显著相关（P<0.01）。下同。
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2.2 不同发病程度对土壤酶活性的影响
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病害的发生会影响土壤酶活性（图1），具体表现为随着烟草黑胫病发病程度的增加，URE、 SUC、CAT 及 ACP 活性呈逐步增加的趋势，且均与发病程度呈显著正相关关系（P<0.05）。土壤 URE 中，5 级病害显著低于不发病的土壤，但随着病级的增加，URE 活性显著增强；SUC 及 CAT 表现为相同的变化趋势：7 级和 9 级病害间无显著差异，但显著高于 0 级及 5 级病害；ACP 随着病害程度的增加，酶活性显著增加，表明病害的发生与土壤酶活性变化有关。
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2.3 土壤微生物对不同发病程度的响应
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2.3.1 不同发病程度对土壤微生物 α 多样性的影响
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土壤中细菌与真菌多样性对病害发生的响应有所不同（表3），细菌中随着发病程度的增加， Shannon 指数逐步降低，发病较重的土壤 Shannon 指数显著低于正常土壤，但 7 级与 9 级病害间无显著差异，而 Simpson 指数与 Chao1 指数随着病害的发生逐步降低，但在 5 级病害中细菌多样性和均匀度呈小范围回升；在真菌中，随着病害的发生，多样性指数均呈降低趋势，但各指数间均无显著差异。
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2.3.2 不同发病程度对土壤微生物 β 多样性的影响
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不同发病程度对土壤微生物群落结构有一定影响（ 图2），在细菌中，PCo1 和 PCo2 能解释 81.92% 的变异，且结果具有显著差异（P<0.01），随着病害的发生，细菌群落逐渐分离（图2A），但正常土壤与 5 级病害土壤细菌较为接近，表明 5 级病害细菌群落与正常土壤相似；在真菌中，PCo1 和 PCo2 能解释 53.81% 的变异，结果具有统计学意义（P<0.01），不同病害程度真菌群落能明显分离 （图2B），发病土壤真菌群落在 PCo1 中未能明显分开，但正常土壤在 PCo1 中与发病土壤能显著分离，表明发病土壤中真菌群落可能有类似的结构且能与正常土壤间有显著差异。
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图1 不同病级烟株根际土壤酶活性
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注：不同小写字母表示不同病级间酶活性差异显著（P<0.05）。
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图2 不同发病程度土壤微生物 PCoA 分析
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注：图中 A 为细菌，B 为真菌。下同。
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2.3.3 不同发病程度对土壤微生物群落丰度的影响
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黑胫病发病的土壤细菌门水平与正常土壤间群落组成存在一定差异（图3），与正常土壤相比，发病土壤中厚壁菌门（Firmicutes）相对丰度高于正常土壤，而变形杆菌门（Proteobacteria）、放线菌门（Actinobacteria）、酸杆菌门（Acidobacteria）、绿弯菌门（Chloroflexi）、浮霉菌门（Planctomycetes）群落丰度低于正常土壤，其中，在发病处理间，随着病害发病程度的增加，拟杆菌门相对丰度升高，而变形杆菌门、放线菌门、酸杆菌门、绿弯菌门、浮霉菌门相对丰度降低；在真菌群落属水平中，发病土壤中被孢霉属、孢球托霉属（Gongronella）和沙蜥属（Saitozyma）相对丰度低于正常土壤，而烟草属（Nicotiana）、镰刀菌属和棘壳孢属（Setophoma） 高于正常土壤（图3B），另外，在发病土壤真菌群落中随着病害程度增加，孢球托霉属（Gongronella） 和被孢霉属丰度减少，烟草属和镰刀菌属丰度增加。从中挑选出差异较大的物种，结合指示物种分析，推测出与黑胫病发病相关的差异物种，结果见图4。
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图3 不同发病程度对土壤微生物群落丰度的影响
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注：A 为不同黑胫病发病程度土壤细菌在门水平下的差异；B 为不同黑胫病发病程度土壤真菌在属水平下的差异。Unclassified：未经分类的；Other：其他；Gemmatimonadetes：芽单胞菌门；Patescibacteria：髌骨菌门；Verrucomicrobia：疣微菌门；Planctorycetes：浮霉菌门；Bacteroidetes：拟杆菌门； Chloroflexi：绿弯菌门；Acidobacteria：酸杆菌门；Actinobacteria：放线菌门；Proteobacteria：变形杆菌门；Firmicutes：厚壁菌门；Acrocalymma（暂未命名）；Morus（暂未命名）；Chaetomium：毛壳菌属；Cylindrocarpon：柱孢属；Setophoma：棘壳孢属；Saitozyma：沙蜥属；Gongronella：孢球托霉属； Fusarium：镰刀菌属；Nicotiana：烟草属；Mortierella：被孢霉属。
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图4 不同病害程度下指示物种分析
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注：A 图为细菌，B 图为真菌。Acidobacteria：酸杆菌门；Actinobacteria：放线菌门；Alicyclobacillus（暂未命名）；Alicyclobacillacea（暂未命名）； Bacillus：芽孢杆菌属；Bacillaceae：芽孢杆菌科；Bacillales：芽孢杆菌目；Bacilli；Alphaproteobacteria：α-变形菌纲；Setophoma_terrestris（暂未命名）； Setophoma：棘壳孢属；Phaeosphaeriaceae：球腔菌纲；Pseudaleuria（暂未命名）；Pyronemataceae（暂未命名）；Pezizales：盘菌目；Pezizomycetes：盘菌纲； Conocybe_apala（暂未命名）；Conocybe：锥盖伞属；Thanatephorus_cucumeris：水稻纹枯病菌；Thanatephorus：瓜亡革菌属；Mortierella_indohii（暂未命名）； Gongronella_butleri（暂未命名）；Cunninghamellaceae（暂未命名）；Mucoraceae：毛霉科；Mucorales：毛霉目；Mucoromycetes：毛霉纲；Morus_alba（暂未命名）；Morus（暂未命名）；Moraceae：桑科；Rosales（暂未命名）。
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2.3.4 不同发病程度土壤差异物种分析
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为了进一步获得不同发病程度中土壤微生物群落的主要差异物种，利用 LEfSe（LDA Effect Size） 分析，对 OTUs 数据进行了统计意义和生物相关性差异分析，结果如图4 所示。不同黑胫病发病程度土壤的细菌，在门水平上，正常土壤酸杆菌门和放线菌门的 LDA 绝对值大，而随着病害的发生变形菌门（5 级病害）和厚壁菌门（7 级和 9 级病害） 的 LDA 绝对值逐渐突出，在图3 中的结果表明，发病土壤中厚壁菌门相对丰度高于正常土壤，而变形菌门、放线菌门、酸杆菌门、绿弯菌门、浮霉菌门群落丰度低于正常土壤，这说明放线菌门、酸杆菌门、厚壁菌门可能是不同发病程度土壤细菌群落门水平差异的主要物种。
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对于真菌而言，在属水平上，正常土壤毛壳菌属（Chaetomium）和孢球托霉属的 LDA 绝对值大，而随着发病程度的增加，Pseudaleuria（5 级病害）、棘壳孢属（7 级病害）、Morus（7 级病害）、亡革菌属（9 级病害）和 Conocybe（9 级病害）逐渐占据优势成为特异种群，图3 的结果表明，发病土壤中被孢霉属、孢球托霉属和沙蜥属相对丰度低于正常土壤，而烟草属、镰刀菌属和棘壳孢属高于正常土壤，表明孢球托霉属和棘壳孢属可能是不同发病程度土壤真菌群落属水平差异的主要物种。
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2.4 土壤环境与微生物间的相关性
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基于表2 和图1 结果，选择 6 个差异较大的土壤理化指标（SOM、AN、NO3--N、NH4 +-N、AP、 AK）和 2 个差异较大的土壤酶（URE、ACP），结合 OTUs 数据矩阵来进行冗余分析（RDA），探究土壤环境变量与优势菌的相关性（图5）。结果表明，放线菌门和酸杆菌门与 SOM、AN、AK、 AP、NH4 +-N、NO3--N、URE、ACP 呈显著负相关关系；放线菌门和酸杆菌门与正常土壤和 5 级病害土壤细菌群落均在坐标轴右侧，而厚壁菌门与上述物理指标呈显著正相关关系，且厚壁菌门与发病程度较高的细菌群落处于同一坐标象限（图5A）。在真菌群落中，亡革菌属、棘壳孢属和锥盖伞属（Conocybe）与土壤 SOM、AN、 AK、AP、NH4 +-N、NO3--N、URE、ACP 呈显著正相关关系，而孢球托霉属与 AN、NH4 +-N、 NO3--N、AP、AK、ACP 呈显著负相关关系（ 图5B）。
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图5 土壤环境与微生物间的相关性
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3 讨论
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3.1 根际土壤理化性状、酶活性对黑胫病不同发病程度的响应
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土壤营养平衡是保证作物健康生长的基础，一般而言，土传病害暴发后土壤养分失调[18]，另外，土壤物理性状的变化也对病害的发生及蔓延影响较大[19]，而烟草黑胫病属于典型的土传病害，其发生本质是土传病菌的生长和繁殖，土壤温度、湿度、酸碱度及养分直接或间接地影响其传播[20]，在本研究中，黑胫病发病土壤的 AN、 NO3--N、NH4 +-N、AP 及 AK 含量均显著高于未发病土壤（P<0.05），在发病土壤中，随着发病程度的增加，土壤 SOM、AN、NO3--N 及 AP 含量升高，且处理间差异显著，与未发病土壤相比发病土壤中速效养分累积，导致这一结果的原因可能是，一方面，发病烟株生长缓慢与土壤养分吸收降低有关；另一方面，烟株发病后有较多的植株组织掉落土体，被微生物分解后导致土壤养分升高[21]。有研究表明，土壤中较高的铵态氮和硝态氮的含量会抑制土传真菌病害的发生[22]；另有研究表明，硝态氮可以降低香蕉枯萎病[23]和大白菜斑点病的发生[24]。本研究结果中，随着病害的发生土壤中硝态氮逐步升高，这可能是植株与土壤间的应答机制，通过对硝态氮的累积来抵御病害的发生。土壤酶作为衡量土壤健康状况的必不可少的土壤微生物学指标，在土壤微环境和抗病机理上有重要作用，在本研究中发病较重的土壤酶活性均显著高于正常土壤，前人在相同地区对土传病害的研究结果与本研究结果一致[25]，这可能是微生物提高其相关活性以响应土传病害发生的表现，以达到抗逆目的的活性。另外，过氧化氢酶能够促进生物的呼吸过程，将有机物氧化反应产生的过氧化氢分解为水和氧，从而降低过氧化氢对生物和土壤的毒害作用，病害发生会使抗毒性酶活性提高，减轻植株受害程度[26]，因此，土壤养分含量和酶活性与黑胫病的发生密切相关。
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3.2 根际土壤微生物对黑胫病不同发病程度的响应
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根际是植物自己创造的有利于植物生长和健康的微生态系统，土壤有益菌和病原菌是主要的影响因素[27]。但在复杂的根际微生态系统中，根际微生态抗土传真菌病害的作用机制仍不清晰，有学者指出土壤根际分泌物及土壤微生物直接或相互作用抑制病害发生[28]，根际微生物的群落组成是防疫病菌侵染的第一道防线，在一些土壤中会存在抑制病原菌的微生物，且已有抑制 Foxysporum、Rhizoctonia 等真菌病原菌的先例[29]，本研究中放线菌门、酸杆菌门、孢球托霉属在未发病土壤中相对丰度高于发病土壤，且随着发病程度的增加相对丰度有逐渐下降的趋势，可能原因是酸杆菌门的作用主要是降解植物残体多聚物[30] 和参与铁循环[31-32]，放线菌门则能够分解纤维素和木质素，丰富的放线菌有利于土壤中植物有机残体的分解[33]。另外，厚壁菌门、酸杆菌门、孢球托霉属 3 类菌群能有效改善土壤生态环境和养分供应状况[34]，促进烟株的生长发育，它们相对丰度的下降会减弱烟株必需物质循环，导致抗性降低，同时有益菌数量的减少可能还会导致病原菌增长，进一步造成严重病害。同时，厚壁菌门、棘壳孢属在发病土壤中相对丰度高于未发病土壤，且随着发病程度的增加丰度呈上升趋势，而有研究表明厚壁菌门和棘壳孢属菌落与病害的发生密切相关[35-36]。此外，放线菌门、酸杆菌门、孢球托霉菌均为未发病土壤中的指示物种，且与各环境因子呈现负相关关系，厚壁菌门和棘壳孢属为发病土壤中的差异物种。因此，推测土壤中相对丰度较高的放线菌门、酸杆菌门、孢球托霉属和相对丰度较低的厚壁菌门、棘壳孢属等微生物可降低烟草黑胫病的发病水平，具体影响机制还有待进一步研究。
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4 结论
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土壤 SOM、TN、NO3--N、NH4 +-H、AK、URE 活性、SUC 活性、ACP 活性和 CAT 活性均与发病程度呈显著正相关关系；在微生物群落中，随着黑胫病的发生细菌的多样性随之降低，而对真菌群落影响较小；根际土壤中放线菌门、酸杆菌门、孢球托霉属相对丰度降低和厚壁菌门、棘壳孢属相对丰度增加是烟草黑胫病严重发生的重要微生物因素。
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摘要
为探究烟草黑胫病不同发病程度与土壤生态环境影响因子之间的关系，明确与黑胫病发病程度相关的因素，为今后黑胫病的生物防疫工作提供理论基础。本研究通过田间调查，收集烟草黑胫病不同发病程度的根际土壤（病级：0、5、7、9 级），测定了土壤理化指标和酶活性，并采用 16S DNA 和 ITS 基因测序技术分析了烟株发病与未发病根际土壤细菌及真菌群落结构的差异。结果表明：（1）黑胫病发病土壤的碱解氮（AN）、硝态氮 （NO3 - -N）、铵态氮（NH4 + -N）、有效磷（AP）、速效钾（AK）、蔗糖酶（SUC）、过氧化氢酶（CAT）及酸性磷酸酶（ACP）与正常土壤相比最高分别增加了 197.53 mg/kg、82.67 mg/kg、33.17 mg/kg、65.7 mg/kg、358.07 mg/kg、 8.84 mg/（d·g）、56.80 µmol/（h·g）、3938.69 nmol/（h·g），且各处理间达到显著差异（P<0.05）；（2）与未发病土壤相比，发病土壤细菌、真菌群落结构多样性较低，且随着发病程度增加，多样性逐步降低；（3）发病土壤厚壁菌门、镰刀菌属、棘壳孢属相对丰度高于正常土壤，而变形杆菌门、放线菌门、酸杆菌门、绿弯菌门、浮霉菌门、被孢霉属、孢球托霉属和沙蜥属群落丰度则低于正常土壤；（4）指示物种分析表明，与正常土壤相比，发病土壤中放线菌门、酸杆菌门、厚壁菌门、孢球托霉属和棘壳孢属存在显著正响应，为病害发生的指示物种；（5） 冗余分析（RDA）表明，放线菌门、酸杆菌门、孢球托霉属与病害发生呈负相关，而厚壁菌门、棘壳孢属则相反。综上所述，根际土壤中放线菌门、酸杆菌门、孢球托霉属相对丰度增加和厚壁菌门、棘壳孢属相对丰度降低是烟草黑胫病发病的重要微生物因素。
Abstract
In this study，in order to explore the relationship between the different incidence of tobacco black shank and soil ecological environment factors，to clarify the factors related to the incidence of black shank，and to provide a theoretical basis for the future biological epidemic prevention of black shank，the rhizosphere soils（disease grades：0，5，7，and 9）with different incidences of tobacco black shank were collected through field investigations，and the soil physical and chemical indexes and enzyme activities were determined，and 16S DNA and ITS gene sequencing technologies were used. The differences of bacterial and fungal community structure in the rhizosphere soil of diseased and uninfected tobacco plants were analyzed. The results showed：（1）Alkali-hydrolyzable nitrogen（AN），nitrate nitrogen（NO3 - -N），ammonium nitrogen（NH4 + -N），available phosphorus（AP），available potassium（AK），sucrose enzyme（SUC），catalase（CAT） and acid phosphatase（ACP）increased by 197.53 mg/kg，82.67 mg/kg，33.17 mg/kg，65.7 mg/kg，358.07 mg/kg，8.84 mg/（d·g），56.80μmol/（h·g），3938.69 nmol/（h·g），respectively，compared with normal soil and there were significant differences among the treatments（P<0.05）；（2）Compared with the uninfected soil，the diversity of bacterial and fungal community structure of the diseased soil was low，and the diversity gradually decreased with the increase of the disease degree；（3）The relative abundances of B.Firmicutes，F.Nicotiana，F.Fusarium，F.Setophoma in the diseased soil were higher than those in the normal soil，while B.Proteobacteria，B.Actinobacteria，B.Acidobacteria，B.Chloroflexi，B. Planctomycetes，F.Mortierella，F.Gongronella and F.Saitozyma community abundances were lower than those in the normal soil；（4）The indicator species analysis showed that compared with normal soil，B.Actinobacteria，B. Acidobacteria， B.Firmicutes，F.Gongronella and F.Setophoma had significant positive responses and were the indicator species for disease occurrence；（5）Redundancy analysis（RDA）showed that B.Actinobacteria，B.Acidobacteria and F.Gongronella were associated with disease occurrence and were negatively correlated，whereas B.Firmicutes and F.Setophoma were the opposite. In conclusion，the increased relative abundances of B.Actinobacteria，B.Acidobacteria，and F.Gongronella and the decreased relative abundances of B.Firmicutes and F.Setophoma in the rhizosphere soil were important microbial factors for the pathogenesis of tobacco black shank.