中国是全球最大的柑橘生产大国，根据国家统计局公开数据，2021 年全国柑橘总产 5595.61 万 t，同比 2020 年增长 8%^[1]。黄龙病是我国柑橘生产的头号杀手，主要利用病苗、嫁接、砧木运输、木虱等多种方式传播^[2]。黄龙病菌的潜伏期明显高于其他病原菌。果实的典型病症：不正常的着色、小果和畸形，因产生蜡质而失去光泽。果农称其为“红鼻子果”或“红肩果”。病叶在发病早期出现斑点黄化，病原蔓延到全株时，新枝分生的叶子往往会黄化。病根表皮易脱落、腐烂。黄龙病是一种由韧皮部杆菌所致的柑橘病，每年黄龙病给我国带来的经济损失高达数十亿元。此病在全球流行，尤其是中国和美国。黄龙病的治疗方法已成为世界上最大的技术瓶颈之一。当前，黄龙病的防治措施主要有两类：一是采用传统控制措施，即栽植无病苗木、严防木虱、清除病树；二是药物防治，包括化学抗生素、窄谱靶向药物、免疫诱导剂、纳米制剂等^[3]。SecA 是存在于柑橘黄龙病菌（CLas）细胞膜上的外分泌蛋白转运酶，缺乏 SecA 会导致细菌功能和感染能力的紊乱。Akula 等^[4]基于 SecA 的结构特征，设计了具有较强的抗菌能力的小分子药物。Palmer 等^[5]根据水杨酸结构，设计的结构类似物在拟南芥叶片中同样增强了病原体相关蛋白的表达，表明这些小分子具有潜在的柑橘免疫诱导活性，可作为潜在的黄龙病防治药物。研究表明，0.56 kg/hm² 的纳米氧化锌对柑橘溃疡病也有一定程度的治疗效果^[6]。芽孢杆菌是一种能在有氧和兼性厌氧的环境中产生孢子的革兰氏阳性菌。芽孢杆菌在生长期间，通过与病原菌争夺养分和受侵染的位置，在叶片和根系中起寄生作用，分泌出抗菌剂，从而抑制病菌的生长，同时诱发机体对病菌的抗性，达到生物控制的目的。在生长期间，芽孢杆菌会产生一系列的代谢物，这些物质可以抑制真菌和细菌的活动。芽孢杆菌是一种很好的抗植物病原菌方法^[7]。已有研究证明枯草芽孢杆菌^[8]、解淀粉芽孢杆菌^[9]均可缓解黄龙病病情。有机肥料对土壤微生物的含量有一定的促进作用，但与复合菌株结合可显著增加微生物量。有机肥添加复合微生物菌剂由于含有有益微生物菌群、活性酶、有机质及多种微量元素，具有改良土壤、增加产量、提高品质的优点，目前已在烟草、小麦、马铃薯、油菜等作物上应用^[10-14]。美国佛罗里达大学 Ma 等^[15] 在《自然通讯》杂志上发表了一个新的研究结果，柑橘韧皮组织的 CLas 感染诱导活性氧产生，随后导致韧皮组织细胞死亡，这证实了柑橘黄龙病是一种可以用诸如尿酸、芦丁或赤霉素等抗氧化剂来治疗的免疫调节疾病。抗氧化应激的措施可能会缓解 CLas 黄龙病对当地柑橘种植区的免疫损害，其中包括优化植物生长素的应用，如赤霉素和油菜素内酯，并进行抗氧化处理^[15]。本试验同时施用有机肥、赤霉素、复方芽孢杆菌，观察三者对黄龙病的缓解作用。已有研究表明通过树干注射抗生素可不同程度缓解柑橘黄龙病病情，如土霉素、四环素和青霉素^[16-18]，但停药后第 2 年黄龙病皆易复发。本研究也遇到了同样的问题，停止注射混合芽孢杆菌等处理后，病树病情开始恶化，推测原因为芽孢杆菌未能成功定殖，不能进入筛管杀灭或抑制柑橘黄龙病菌，下一步将优化芽孢杆菌与赤霉素的使用方法，提高其防治效果。

1 材料与方法

试验于 2022 年 7—9 月在广东省农业科学院进行。

1.1 材料

试验材料：柑橘品种为来源于江门的茶枝柑老树和廉江的红江橙树苗，均为发病状态，经症状观察及 qPCR 检测确定为黄龙病感染，病株随机分成 2 组：对照组和处理组，每组 6 株。

试剂与仪器：赤霉素；有机肥；复合芽孢杆菌（ 解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌，枯草芽孢杆菌等）；LB 培养基； 引物 CQULA04F：5′-TGGAGGTGTAAAAG TTGCCAAA-3′，CQULA04R：5′-CCAACGAAAAGATCAGATATTCCTCTA-3 ′，由上海生工合成；TaKaRaMiniBEST Bacteria Genomic DNA Extraction Kit Ver.2.0，荧光定量 PCR 试剂盒（SYBR Premix Ex Taq II），日本 TaKaRa 公司； 微量注射器，实时荧光定量 PCR 仪，Bio-Rad Laboratories Co.， USA；超净工作台，离心机，紫外分光光度计，恒温摇床，微量移液器，立式自动电热压力蒸汽灭菌器。

1.2 方法

处理组设置有机肥配施复合芽孢杆菌及赤霉素处理，对照组不做任何处理，每组 6 棵病树，每棵树取样均取 3 次，对柑橘黄龙病菌含量、土壤有机质及土壤微生物进行比较分析。

1.2.1 内生菌的分离与鉴定

（1）取病树显症叶片 4～5 片；

（2）用自来水将新鲜植物表面洗净，于适量 95% 酒精中浸泡 5 min；

（3）无菌水冲洗 3～4 次，置于超净台备用；

（4）用研钵将病叶在液氮中碾碎，加入 2 mL 无菌水；

（5）吸取 0.4 mL 上清液于 4 mL 无菌水中，稀释成 10^-1 溶液；吸取 0.01 mL 上清液于 1 mL 无菌水中，稀释成 10^-2 溶液；

（6） 在超净台中将 500 µL 样液移至已倒好的 6 个平板中，酒精灯旁分别涂布，对应编号，标记稀释倍数、日期、组别，于室温中倒置培养 20 h；

（7）提取 DNA 后测序鉴定，其中一株为枯草芽孢杆菌，将其加入混合芽孢杆菌菌液中共同培养。

1.2.2 复合肥

称取 15 g 复合肥溶于 1 L 水中，连续施肥 15 d。

1.2.3 混合芽孢杆菌

在 37℃ 的摇床中（150 r/min），以 LB 培养 24～48 h，直至 OD₆₀₀ 为 1 左右，连续 15 d 每日注射处理组病树树干 30 mL，其余 470 mL 浇于根部。

1.2.4 赤霉素

分别称取 25 mg 赤霉素溶于 1 L 水中，充分溶解后装于喷壶中，连续 15 d 对处理组病树进行叶面喷施，病树所有叶片均喷洒 3 次左右后，其余赤霉酸溶液浇于根部。

1.2.5 土壤样品提取

分别在病树的东西南北 4 个方位取适量土样，测有机质和微生物，两次重复，每棵树各取样 3 次，密封放 4℃冰箱保存待用。

1.2.6 实时荧光定量 PCR 检测

（1）取病叶中脉剪碎后在液氮中磨成粉末，分别加入 1 mL ddH₂O，100 r/s 去除沉淀叶片组织后参考 TaKaRa 细菌基因组 DNA 提取试剂盒步骤提取 DNA：

①用 1.5 mL Tube 收集 1.0～5.0×10⁹ 个细胞， 12000 r/min 离心 2 min，弃上清（细胞培养液）。

②加入 180 μL 的 Buffer GL、20 μL 的 Proteinase K（20 mg/mL）和 10 μL 的 RNase A（10 mg/mL）充分振荡混匀，于 56℃水浴温育 10 min，此时溶液应呈透明、澄清状。

③ 加入 200 μL 的 Buffer GB 和 200 μL 的 100% 乙醇，充分吸打混匀。

处理好的细胞按如下操作进行：

1）将 Spin Column 安装在 Collection Tube 上，溶液移至 Spin Column 中，12000 r/min 离心 2 min，弃滤液。

2）将 500 μL 的 Buffer WA 加入至 Spin Column 中，12000 r/min 离心 1 min，弃滤液。

3）将 700 μL 的 Buffer WB 加入至 Spin Column 中，12000 r/min 离心 1 min，弃滤液。Buffer WB 中已经加入了指定体积的 100% 乙醇。沿 Spin Column 管壁四周加入 Buffer WB，有助于完全冲洗沾附于管壁上的盐分。

4）重复操作步骤 3）。

5）将 Spin Column 安置于 Collection Tube 上， 12000 r/min 离心 2 min。

6）将 Spin Column 安置于新的 1.5 mL 离心管上，在 Spin Column 膜的中央处加入 50～200 μL 的灭菌水或 Elution Buffer，室温静置 5 min。将灭菌水或 Elution Buffer 加热至 65℃使用时有利于提高洗脱效率。

7）12000 r/min 离心 2 min 洗脱 DNA。如需获得更大收量，可将离心液重新加入到 Spin Column 膜的中央或再加入 50～200 μL 的灭菌水或 Elution Buffer，室温静置 5 min 后，12000 r/min 离心 2 min 洗脱 DNA。

（2）黄龙病病原菌——亚洲韧皮部杆菌的实时荧光定量 PCR 检测

荧光染料法：使用 Takara 荧光定量 PCR 试剂盒 SYBR ® Premix Ex Taq Ⅱ 进行检测。

程序：95.0℃，1 min；95.0℃ 15 s，59.0℃ 15 s， 72.0℃ 20 s，42 个循环；72.0℃，20 s+Plate read，95.0℃ 30 s。

SGI—qPCR 主反应混合液配置反应体系为 25 μL：SYBR Premix Ex Taq Ⅱ（2×）12.5 μL； 引物对：CQULA04F（10 μmol/L）1.0 μL，CQULA04R （10 μmol/L）1.0 μL；DNA 模板 2.0 μL；无菌水 8.5 μL。

SYBR Premix Ex Taq 内含 HS、dNTP、Mixture、 Mg²⁺、SYBR GreenI 等；引物序列^[19]：CQULA04F 为5 ′-TGGAGGTGTAAAAG TTGCCAAA-3′，CQULA04R 为 5′-CCAACGAAAAG ATCAG ATATTCCTCTA-3′。

1.2.7 土壤基础养分测定

测定土壤有机质、全氮、全磷、全钾、碱解氮、有效磷、速效钾和 pH 等指标，其中采用玻璃电极法测定 pH，采用高温外热重铬酸钾氧化-容量法测定有机质，采用凯氏-蒸馏滴定法测定全氮，采用硫酸-高氯酸消煮-钼锑抗比色法测定全磷，采用火焰原子吸收分光光度法测定全钾，采用碱解扩散法测定碱解氮，采用盐酸-氟化铵提取-钼锑抗比色法测定有效磷，采用乙酸铵提取-火焰原子吸收分光光度法测定速效钾。

1.2.8 土壤微生物群落结构测定

样品提取 DNA，利用细菌保守区设计引物后进行 PCR 扩增，扩增产物进行纯化、定量和均一化形成测序文库。经质检合格后的测序文库，利用 Illumina HiSeq 2500 进行测序。16S r RNA 基因高通量测序由北京百迈客生物科技有限公司完成，通过 Illumina HiSeq 测序平台测定细菌 V3-V4 可变区^[20]。

1.2.9 数据处理

利用 Alpha 多样性分析方法，对样品内的细菌群落多样性进行 Ace、Chao1、Shannon 及 Simpson 指数统计，并绘制等级丰度曲线；利用 Qiime2 的 taxa barplot 插件绘制物种堆叠柱状图，并获得各个分类水平下的 OTU table；利用 R 语言的 ape 包和 vegan 包分别进行主成分分析（PCoA）和冗余分析 （RDA），ggplot 2 包绘图。

2 结果与分析

2.1 经分离鉴定得到枯草芽孢杆菌

从病树上选取显症叶片，研磨得提取液后用稀释涂布平板法进行内生菌的培养，再采用分段划线的方法进行分离、纯化，经 3～4 次的分离纯化直至得到单一的纯种菌落为止。提取菌落 DNA 测序，鉴定其中 1 株为枯草芽孢杆菌。

2.2 处理对柑橘黄龙病菌含量的影响

经过 15 d 复合肥、芽孢杆菌、赤霉素的联合处理，处理组的显症叶片已显著减少，与未经处理的对照组差异较大。荧光定量 PCR 结果显示，处理前对照组和处理组差异较小，处理后对照组的 CLas 含量明显上升，从基线到指数增长的拐点对应的循环次数（Ct 值）降低了 8.32；处理组的 Ct 值从初始的 25.10 增加到了 31.46，病菌含量大幅度减少。见图1。

注：Ct 值为 PCR 扩增中从基线到指数增长的拐点对应的循环次数。

2.3 土壤基础性状

2.3.1 土壤 pH

处理组的 pH 平均值为 7.21，对照组为 7.73，由此可见，芽孢杆菌、赤霉素、复合肥联合使用可有效降低 pH。见图2。

2.3.2 土壤有机质

处理组的有机质含量高达 18.97 g/kg，比对照组增加了 22.0%，说明处理组的土壤有机质高，适宜柑橘生长。见图3。

2.3.3 土壤全氮、全磷、全钾

全氮、全磷、全钾是指土壤中所含的植物可利用和不可利用的氮、磷、钾，土壤有机质和全氮含量与土壤呼吸强度密切相关。处理组与对照组的全氮、全磷均无明显差异，但处理组的全钾含量显著高于对照组。见图4。

2.3.4 土壤碱解氮、有效磷、速效钾

碱解氮是通过碱解的方式所测定出的氮含量；有效磷、速效钾是指可以被植物直接迅速利用，或经过简单转化而直接利用的磷、钾。同土壤肥力的相关性较大。测定结果显示，处理组的碱解氮、有效磷、速效钾均显著高于对照组，其中，速效钾从 177.28 mg/kg 增加到了 358.10 mg/kg，增加幅度最大，为 102.0%。见图5。

2.4 土壤微生物

黄龙病是从树根开始感染病菌，防治要从根治起，而非传统的叶茎治理。本试验通过施用芽孢杆菌微生物肥料，大量提高柑橘根区的有益微生物数量，并能有效地抑制和杀死土壤中的有害细菌，改善土壤环境，提高果树的养分，“以菌治菌”杀灭土壤有害病菌，优化土质，疏通根茎韧皮部筛管，解决营养物质输送障碍问题，促进新根的生长，恢复病树养分。

2.4.1 不同处理对土壤微生物群落α多样性的影响

对土壤样本进行细菌检测，共获得有效序列 30036 条。从细菌α多样性指数（表1）得出，有机肥配施复合芽孢杆菌、赤霉素处理导致土壤中细菌多样性呈现下降趋势，与不作任何处理的对照组土壤微生物多样性和丰富度具有显著差异，说明有机肥配施复合芽孢杆菌、赤霉素对土壤细菌群落结构具有显著影响。

2.4.2 不同处理对土壤微生物群落组成的影响

2.4.2.1 门水平下的相对丰度

微生物群落组成测定结果（图6）显示，处理组土壤中细菌优势菌门为变形菌门（Proteobacteria）、厚壁菌门 （Firmicutes）、酸细菌门（Acidobacteriota）、拟杆菌门 （Bacteroidota）、黏球菌门（Myxococcota）、迟杆菌门 （Latescibacterota）、甲烷氧化菌（Methylomirabilota）、放线菌门（Actinobacteriota）、NB1-j、疣微菌门 （Verrucomicrobiota）、脱硫杆菌门（Desulfobacterota）、芽单胞菌门（Gemmatimonadota），相对丰度分别为 87.03%、6.17%、3.13%、1.54%、1.26%、0.36%、 0.24%、0.16%、0.11%、0.10%、0.08%、0.02%。对照组优势菌门为变形菌门、酸细菌门、厚壁菌门、甲烷氧化菌、放线菌门、黏球菌门、迟杆菌门、脱硫杆菌门、拟杆菌门、NB1-j、芽单胞菌门、疣微菌门，相对丰度分别为 59.26%、15.77%、11.79%、2.89%、 2.40%、2.23%、1.98%、1.12%、0.67%、0.64%、 0.14%、0.13%。

2.4.2.2 科水平下的相对丰度

微生物群落组成测定结果（图7）显示，处理组土壤中细菌优势菌科为肠杆菌科（Enterobacteriaceae）、黄单胞菌科（Xanthomonadaceae）、丛毛单胞菌科（Comamonadaceae）、假单胞菌科 （Pseudomonadaceae）、色杆菌科（Chromobacteriaceae）、伯克霍尔德菌科（Burkholderiaceae）、乳酸细菌科（Lactobacillaceae）、果胶杆菌科（Pectobacteriaceae）、草酸杆菌科（Oxalobacteraceae）、气单胞菌科（Aeromonadaceae）、罗丹细菌科（Rhodanobacteraceae）、Vicinamibacteraceae，相对丰度分别为 29.10%、14.98%、7.25%、7.09%、5.89%、 4.19%、3.58%、3.00%、2.43%、2.03%、1.86%、1.60%。对照组优势菌科为假单胞菌科、Vicinamibacteraceae、亚硝化单胞菌科（Nitrosomonadaceae）、未培养物（uncultured）、丛毛单胞菌科、果胶杆菌科、伯克霍尔德菌科、肠杆菌科、乳酸细菌科、链球菌科（Streptococcaceae）、黄单胞菌科、罗库菌科（Rokubacteriales），相对丰度分别为 11.89%、8.38%、6.01%、5.75%、5.69%、 4.98%、4.09%、3.92%、3.63%、3.60%、3.54%、2.79%。

2.4.2.3 属水平下的相对丰度

微生物群落组成测定结果（ 图8） 显示，处理组土壤中细菌优势菌属为大肠埃希菌-志贺氏菌属（EscherichiaShigella）、假单胞菌属（Pseudomonas）、溶杆菌属 （Lysobacter）、贪铜菌属（Cupriavidus）、乳杆菌属 （Lactobacillus）、伴突属（Sodalis）、假葛兰氏菌 （Pseudogulbenkiania）、热单胞菌（Thermomonas）、 Arenimonas、气单胞菌属（Aeromonas），相对丰度分别为 7.82%、7.09%、5.85%、3.77%、3.58%、 3.00%、2.70%、2.52%、2.33%、2.03%。对照组优势菌属为假单胞菌属、Vicinamibacteraceae、uncultured、伴突属、MND1、乳杆菌属（Lactobacillus）、乳球菌属（Lactococcus）、雷尔氏菌属（Ralstonia）、罗库菌属（Rokubacteriales）、杜氏杆菌属（Dubosiella），相对丰度分别为 11.89%、7.65%、5.75%、4.98%、 3.98%、3.63%、3.46%、3.18%、2.79%、2.46%。

2.4.2.4 种水平下的相对丰度

微生物群落组成测定结果（图9）显示，处理组土壤中细菌优势菌种为大田溶杆菌（Lysobacter）、豆乳球菌（Lactococcus piscium）、朝鲜高温单胞菌（Thermomonas koreensis）、福格斯氏菌（Vogesella）、未培育土样（uncultured_soil）、顺天几丁质杆菌（Chitinibacter suncheonensis）、 uncultured_bacterium、独岛溶杆菌（Lysobacter dokdonensis）、铜绿假单胞菌（Cupriavidus oxalaticus）、Vogesella_amnigena，相对丰度分别为 1.28%、1.23%、1.09%、1.09%、0.89%、0.66%、 0.58%、0.57%、0.57%、0.53%。对照组优势菌种为豆乳球菌、bacterium_WH2-1、缓慢葡萄球菌 （Lactococcus piscium）、uncultured_gamma，相对丰度分别为 3.46%、1.74%、0.89%、0.54%。

2.4.3 土壤基础养分对微生物群落的影响

在门水平下，基于冗余分析（RDA）研究土壤基础养分与微生物群落之间的关系，结果显示，在不同处理下土壤细菌中，RDA1 和 RDA2 分别解释了 77.71% 和 18.04% 细菌群落变量（ 图10），土壤有机质、全钾、碱解氮、有效磷和速效钾均与细菌群落组成有关，其中 P 值分别为 0.060、0.068、 0.078、0.078 和 0.019，对细菌群落结构的解释度分别为 96.87%、96.95%、96.67%、96.69% 和 97.53%。

在属水平下，RDA1 和 RDA2 分别解释了 56.59% 和 17.2% 细菌群落变量（图11），土壤有机质、全钾、碱解氮、有效磷和速效钾的 P 值分别为 0.021、0.092、0.058、0.035 和 0.031，对细菌群落结构的解释度分别为 94.98%、93.24%、94.13%、 94.53% 和 94.52%。

在种水平下，RDA1 和 RDA2 分别解释了 59.3% 和 15.48% 细菌群落变量（图12），土壤有机质、全钾、碱解氮、有效磷和速效钾的 P 值分别为 0.022、0.097、0.058、0.040 和 0.010，对细菌群落结构的解释度分别为 97.46%、96.38%、97.18%、 97.49% 和 97.73%。

注：p1-p12 依次为酸杆菌门（Acidobacteriota）、放线菌门（Actinobacteriota）、拟杆菌门（Bacteroidota）、脱硫杆菌门（Desulfobacterota）、厚壁菌门 （Firmicutes）、芽单胞菌门（Gemmatimonadota）、迟杆菌门（Latescibacterota）、甲烷氧化菌（Methylomirabilota）、黏球菌门（Myxococcota）、NB1-j、变形菌门（Proteobacteria）、疣微菌门（Verrucomicrobiota）。

注：g1-g106 表示 DS.100、RB41、全噬菌属（Holophaga）等 106 个属。

注：s1-s37 表示放线细菌（Actinobacterium_WWH12）、螺旋形梭状芽孢杆菌（Clostridium spiroforme）、未知的（unidentified）等 37 个种。

3 讨论

3.1 不同处理对黄龙病菌含量的影响

唐建中等^[21]、孔庆军等^[22]均发现芽孢杆菌属中一些种类能够分泌抑菌物质，能够恢复罹病柑橘中受影响的微生物群，为减少黄龙病菌数量提供一种新的方法。Munir 等^[8]施用枯草芽孢杆菌 10⁶ cfu/mL 处理后 4 d，叶片中脉 CLas 拷贝数减少 1000 倍。Tang 等^[9] 用 OD600nm_x0019_1 解淀粉芽孢杆菌悬浮液对柑橘进行 7 次灌溉后，脱毒率达到 50%。均证实了在与 CLas 相似的生态位中，内生菌定殖可能通过产生抗生素或脂肽、细菌素蛋白质来直接抑制病原菌。赤霉素可上调编码 H₂O₂ 的清除酶基因和下调 NADPH 氧化酶，用赤霉素喷洒受黄龙病影响的柑橘叶片可降低韧皮部组织中的 H₂O₂ 浓度和细胞死亡，并减轻黄龙病症状^[15]，本试验联合施用赤霉素和混合芽孢杆菌，根据实时荧光定量 PCR 结果表明，处理组病菌数量的降低直接证实内生菌和赤霉素有防治作用。

3.2 不同处理对土壤理化性质的影响

土壤养分含量会随着种植制度、人为调节、土壤类型等条件的不同而产生较大的差异^[23]，随着有机肥、芽孢杆菌、赤霉素的加入，土壤中化学成分和物理特性会产生较大的差异，进而造成土壤基础养分和 pH 的变化。柑橘对土壤的酸碱度适应范围比较广泛，pH 达到 5～9.5 都可以生长，pH 为 4.5～7.5 较为合适^[24]。本研究结果表明，经过处理后土壤 pH 下降，处理组柑橘土壤中有机质、全钾、碱解氮、有效磷、速效钾的含量显著高于对照组。李国良等^[25]研究发现，有机肥配施复合芽孢杆菌使贡柑土壤 pH 显著降低，且碱解氮、有效磷、速效钾均有所提高。结果表明有机肥配施芽孢杆菌能提高土壤养分肥力水平，提高土壤保水保肥能力。土壤 pH 变化和土壤养分失衡是导致土壤理化性质恶化的主要原因^[26-27]，因此，在种植过程中应注意调控 pH 及土壤养分。

3.3 不同处理对土壤微生物群落组成及多样性的影响

Shannon 和 Simpson 指数数值越大，反映出样品的物种多样性越高。从数据上看，对照组的土壤细菌多样性明显超过处理组。同时，Chao1 和 Ace 指数的增长也表明样品的物种丰富度在提升，这进一步证实对照组的土壤细菌丰富性要高于处理组。分析这一现象的原因，可能是芽孢杆菌能够分泌小分子抑菌肽，这种物质能够有效抑制细菌细胞、蛋白质以及多肽类的合成，从而抑制了部分土壤中细菌的繁殖。在丰度前 10 的优势菌属，处理组与对照组的比较中，处理组的假单胞菌属（Pseudomonas）、乳杆菌属（Lactobacillus）细菌种群数量减少； 相关研究表明，假单胞菌属菌株具有调节植物生长激素的作用^[28]，乳杆菌属益生菌产生的细菌素具有广泛的抑菌谱，对沙门氏菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌等致病菌具有显著的抑制作用^[29]。

3.4 土壤基础养分对微生物群落的影响

土壤有机质、全钾、碱解氮、有效磷和速效钾均与细菌群落组成有关，其中在门水平下，速效钾显著影响细菌群落组成，脱硫杆菌与速效钾、有机质呈负相关，甲烷氧化菌与有机质、全钾呈负相关，黏球菌门与全钾呈负相关，酸杆菌门与速效钾呈负相关，NB1-j 与有效磷呈负相关；拟杆菌门、变形菌门与有机质呈正相关。

在属水平下，有机质、有效磷和速效钾显著影响细菌群落组成。Subgroup_17、CCD24、B1.7BS 与全钾呈负相关，土壤红杆菌属、甲基养菌、 DSSD61、MND1 与速效钾呈负相关，Eel.36e1D6、雷尔氏菌与碱解氮、有效磷呈负相关，bacteriap25、 TRA3.20 与有机质呈负相关，MND1 与有效磷呈负相关；福格斯氏菌、脱氮嗜脂环物菌与碱解氮、有效磷呈正相关，丛毛单胞菌与全钾呈正相关，固氮螺菌与速效钾呈正相关，Aquicella 与有效磷、速效钾呈正相关，R7C24 与有机质呈正相关，黄体单胞菌与速效钾呈正相关。

在种水平下，有机质、有效磷和速效钾显著影响细菌群落组成。bacterium_WH2.1 与有机质呈负相关，唾液链球菌与全钾、速效钾呈负相关，弗拉格溶杆菌与碱解氮、有效磷呈负相关，放线菌 _ WWH12 与有机质、全钾呈负相关，鱼乳球菌、梅氏弧菌与碱解氮呈负相关；福格斯氏菌与碱解氮、有效磷、速效钾呈正相关，Vogesella_amnigena 与碱解氮、全钾、有效磷呈正相关，朝鲜高温单胞菌与碱解氮、有效磷呈正相关，向日葵假单胞菌与速效钾呈正相关，螺状梭菌与碱解氮呈正相关。

3.5 黄龙病菌的综合防治

柑橘黄龙病是一种由病原 CLas 引发的植物自身免疫反应，导致韧皮部区域的筛分子细胞和伴胞发生系统性细胞死亡。当黄龙病菌侵入植株后，会在韧皮部寄生并产生大量毒素和分泌物。这些物质逐渐阻塞植物的导管系统，影响水分和养分的正常运输，叶片的光合作用受损，树体营养失衡，抗逆能力降低，生长发育受到严重影响。在黄龙病菌侵入根部后，会导致根系功能减退，使植株无法获得充足的水分和养分，最终导致柑橘树逐渐枯死。

为了全面控制黄龙病，需要从多个方面着手。首先，抑制黄龙病菌的传播是关键。其次，保护树体，增强养料输送，健壮植株也是必不可少的措施。使用赤霉素可以降低韧皮部组织中的 H₂O₂ 浓度和细胞死亡，从而减轻黄龙病的症状。同时，复合芽孢杆菌分泌出的代谢产物既能抑制病菌的生长，又能诱发植物机体对病菌的抗性，有效控制病害的蔓延。然而，从种属水平来看，土壤中的优势种群并非芽孢杆菌。因此，通过添加复合芽孢杆菌，利用菌剂中含有的多种有益细菌及其在土壤中的相互协同作用，可以提高益生菌群在土壤中的浓度，增强对黄龙病菌的抑制作用。

此外，调整有机肥的种类和比例也至关重要。这不仅可以提高土壤有机质含量，为微生物提供碳源和能源，还能优化土壤微生物群落结构，有利于芽孢杆菌的生长和繁殖。通过以上措施改善土壤环境，可以提高土壤中的有益微生物数量，抑制病原菌，优化土壤结构，促进根系生长，提高根系健康度，有效解决营养输送问题。这样，就能在较大程度上防治黄龙病害的发生，保障柑橘树的健康生长。

4 结论

有机肥配施复合芽孢杆菌和赤霉素可以显著降低黄龙病菌含量，有效抑制柑橘黄龙病，还对土壤的有机质、全钾、碱解氮、有效磷、速效钾含量有显著提高作用。

参考文献